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恭喜你~在做分子克隆之前看到了这篇福利好文!

分子克隆技术发展至今,从最经典的酶切酶连法到简便、快速的同源重组法,同源重组技术广受科研小伙伴的青睐!翌圣一步法快速克隆试剂盒(Cat#10911、10912)自上市以来,受到了众多小伙伴的支持!好评如潮!看到各位小伙伴的反馈结果,小翌按捺不住内心的喜悦,要与大家一同分享~


一步法快速克隆试剂盒


翌圣一步法快速克隆试剂盒是一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点,将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点,可高效克隆50 bp-10 kb片段。操作过程简单快速,只需50°C20 min即可完成反应。劲爆的是,多个片段也可以同时克隆哦!


数据展示


01

北京大学

再也不用担心片段太小,载体过大连不上的问题了

克隆方案:克隆SfGFP1-9基因(588 bp)到载体pBOBI-N-flag(9000 bp)上,检测其表达。

使用Hieff Clone? Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)进行克隆,阳性率100%。.jpg

图1. 使用Hieff Clone? Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)进行克隆,阳性率100%。
A:阴性对照转化平板。B:重组转化平板。C:线性化载体检测电泳图。D:目的片段检测电泳图。E:克隆测序对比图。

02

南京农业大学

1kb载体连接,克隆数与阳性率都很高

克隆方案:将目的片段Gmclc1(2352 bp)与表达载体pCAMBIA1300(10217 bp)连接,构建重组载体。
22.jpg图2. 使用Hieff Clone? Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)进行克隆,克隆成功,克隆阳性率为100%。
A:阴性对照转化平板。B:重组质粒转化平板。C:1和2分别为原始载体和线性化载体检测电泳图。D:目的片段检测电泳图。E:菌落PCR鉴定电泳图。F:重组质粒的酶切鉴定电泳图。

03

微生物所

轻轻松松5片段连接

克隆方案:克隆外源基因Pcch(576+867+915+647 bp)pBR322质粒(3996 bp)上,用以表达Pcch蛋白。
33.jpg图3. 使用Hieff Clone? Multi One Step Cloning Kit(Cat#10912)进行克隆,5个片段(总长度7007 bp)一次连接成功。
A:重组质粒转化平板。B:载体酶切后电泳图。C:菌落PCR验证结果;1为原始质粒,2-5为重组质粒,仅检测863 bp的一个目的片段,6为假阳性。D:阳性克隆测序结果。


04

仁济医院

总长度1kb以上,一次成功

克隆方案:克隆Setd2基因(7500 bp)pCDH载体(8000 bp)
44.jpg图4. 使用Hieff Clone? Plus One Step Cloning Kit(Cat#10911)进行克隆,克隆成功。
A:阴性对照转化平板。B:重组质粒转化平板。C:载体和目的片段检测电泳图。D:菌落PCR鉴定电泳图。


部分发表文献


1. Jiang, Y., et al., Plants transfer lipids to sustain colonization by mutualistic mycorrhizal and parasitic fungi[J]. Science, 2017. (IF37.205)

2. Liu C X, Li X, Nan F, et al. Structure and degradation of circular RNAs regulate PKR activation in innate immunity[J]. Cell, 2019. (IF31.398)

3. Xing, Y.H., et al., SLERT Regulates DDX21 Rings Associated with Pol I Transcription[J]. Cell, 2017. 169(4): p. 664-678.e16. (IF31.398)

4. Wang Y, Hu SB, et al. Genome-wide screening of NEAT1 regulators reveals cross-regulation between paraspeckles and mitochondria[J]. Nat Cell Biol. 2018 Oct;20(10):1145-1158. (IF 20.46)

5. Li X., et al., Coordinated circRNA Biogenesis and Function with NF90/NF110 in Viral Infection[J]. Mol Cell. 2017 Jul 20;67(2):214-227.e7. (IF14.548)

6. Yao R W, Xu G, Wang Y, et al. Nascent Pre-rRNA Sorting via Phase Separation Drives the Assembly of Dense Fibrillar Components in the Human Nucleolus[J]. Molecular cell, 2019. (IF14.548)

7. Wu P, Zhang T, Liu B, et al. Mechano-regulation of peptide-MHC class I conformations determines TCR antigen recognition[J]. Molecular cell, 2019, 73(5): 1015-1027. e7. (IF14.548)

8. Qiao HH, Wang F, et al. An ef?cient and multiple target transgenic RNAi technique with low toxicity in Drosophila[J]. Nat Commun. 2018 Oct 8;9(1):4160. (IF 12.353)



效果大家都看到了,那么我们再来看下为什么同源重组法广受大家欢迎呢?
与传统的酶切酶连法相比(图4),一步法克隆技术足足少了2个步骤(片段酶切+产物纯化),这2步最少也要30分钟,省下的时间去运动一下,比如打个羽毛球~跑个步~科研之余,强身健体,拥有一个更健康的体魄、一张更阳光的脸庞~还有一段开挂的人生~

123.jpg 
图5. 分子克隆(载体构建)流程对比图


产 品 推 荐



名称

货号

规格

Hieff Clone?  Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒

10911ES20

20 T

Hieff Clone?  Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆试剂盒

10912ES10

10 T


好啦!看完本期分享的内容,你是不是也心动啦~心动就行动起来吧!小翌带你边做实验边撸福利~

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